+ Responder Tema
Página 1 de 2 12 ÚltimoÚltimo
Resultados 1 al 15 de 23

Tema: Cultivo in vitro

  1. #1
    Fecha de Ingreso
    07 Jul, 10
    Mensajes
    355
    Gracias
    193
    226 gracias recibidas en 131 Posts
    Mencionado
    13 Mensaje(s)
    Etiquetado
    0 Tema(s)
    Citado
    55 Mensaje(s)

    Cultivo in vitro

    Buenas!!

    Me gustaria saber si alguiem domina bien el tema... De cultivo in vitro, ya que despues de comprar los elementos y intentarlo varias veces se me contamina los botes... Y realmente no se que hago mal..
    Me he echo un glovebox y tengo las sales ms+ vitaminas,el agar, bpm y bap. Y desinfecto a conciencia..

    Me he empapado varios videos y leido por varios foros y nada... Y eso que intento hacerlo a la perfeccion!!

    A ver si tenemos algun socio que me eche una mano, pero q realmente conozca el tema a la perfeccion.

    Un saludo...
    A nadie le huelen sus pedos, ni sus hijos le parecen feos!!!

  2. El siguiente Usuario da las gracias a ghoufrane por este Post:

    kus (14/07/2015)

  3. #2
    Fecha de Ingreso
    29 Mar, 09
    Ubicación
    Mediterráneo
    Mensajes
    511
    Gracias
    1,821
    3,690 gracias recibidas en 482 Posts
    Mencionado
    152 Mensaje(s)
    Etiquetado
    0 Tema(s)
    Citado
    204 Mensaje(s)

    Post Re: Cultivo in vitro

    Hola,

    puede que el problema proceda de tu Glovebox casero ¿Estas seguro que es totalmente estanco?
    Sino, el cannabis es una especie que presenta dificultades a arraigarse en vitro. En un estudio intitulado « Multiplicación vegetativa "in vitro" del cáñamo (Cannabis sativa L.)» subrayan que es un material “recalcitrante” in vitro. Si la desinfección no falla, puede que la causa venga de esa dificultad en arragairse.

    Saludos

  4. Los siguientes 5 Usuarios dan las gracias a Rivalpo por este Post:

    ☺aKHeN☺ (07/06/2015), el negris (07/02/2016), kus (14/07/2015), nahiatxo (09/06/2015), wakalao (12/06/2015)

  5. #3
    Fecha de Ingreso
    07 Jul, 10
    Mensajes
    355
    Gracias
    193
    226 gracias recibidas en 131 Posts
    Mencionado
    13 Mensaje(s)
    Etiquetado
    0 Tema(s)
    Citado
    55 Mensaje(s)

    Re: Cultivo in vitro

    Es totalmente estanco!!

    Pero nada... Lo dejo varias semanas y no enraiza..
    Parece q esta mutando pero nada
    A nadie le huelen sus pedos, ni sus hijos le parecen feos!!!

  6. El siguiente Usuario da las gracias a ghoufrane por este Post:

    kus (14/07/2015)

  7. #4
    Fecha de Ingreso
    29 Mar, 09
    Ubicación
    Mediterráneo
    Mensajes
    511
    Gracias
    1,821
    3,690 gracias recibidas en 482 Posts
    Mencionado
    152 Mensaje(s)
    Etiquetado
    0 Tema(s)
    Citado
    204 Mensaje(s)

    Re: Cultivo in vitro

    Si el protocolo de desinfección es correcto, el problema puede venir de las hormonas visto la dificultad de arraigamiento del cannabis. En otro estudio intitulado « Thidiazuron-induced high-frequency direct shoot organogenesis of Cannabis sativa L.» se compararon 3 citoquininas diferentes y las más eficiente fue el Thidiazuron (TDZ).

    Results and Discussion

    Shoot proliferation and multiplication.

    Of the three cytokinins used, TDZ was most effective for shoot proliferation (Table 1). TDZ, a synthetic phenylurea, is considered to be one of the most active cytokinins for shoot induction in plant tissue culture (Huetteman and Preece 1993). Reports suggest that TDZ induces shoot regeneration better than other cytokinins (Thomas 2003; Thomas and Puthur 2004; Husain et al.2007).

    The optimal response in terms of percentage of explants producing shoots with maximum shoot length and the highest number
    of shoot per explant was recorded on MS medium supplemented with TDZ
    (0.5μM; Fig.1a).

  8. Los siguientes 6 Usuarios dan las gracias a Rivalpo por este Post:

    ☺aKHeN☺ (07/06/2015), kus (14/07/2015), nahiatxo (09/06/2015), pep@ (12/10/2016), RamiroP (14/07/2015), wakalao (12/06/2015)

  9. #5
    Fecha de Ingreso
    07 Jul, 10
    Mensajes
    355
    Gracias
    193
    226 gracias recibidas en 131 Posts
    Mencionado
    13 Mensaje(s)
    Etiquetado
    0 Tema(s)
    Citado
    55 Mensaje(s)

    Re: Cultivo in vitro

    medio de cultivo Murashige y skoog + vitaminas, agar, hormonas BAP (citoquininas y auxinas), antibacteriano y antifúngico PPM.

    Y nada...
    A nadie le huelen sus pedos, ni sus hijos le parecen feos!!!

  10. El siguiente Usuario da las gracias a ghoufrane por este Post:

    kus (14/07/2015)

  11. #6
    Fecha de Ingreso
    29 Mar, 09
    Ubicación
    Mediterráneo
    Mensajes
    511
    Gracias
    1,821
    3,690 gracias recibidas en 482 Posts
    Mencionado
    152 Mensaje(s)
    Etiquetado
    0 Tema(s)
    Citado
    204 Mensaje(s)

    Re: Cultivo in vitro

    Para el cultivo in vitro del cannabis, las hormonas BAP son bastantes menos eficientes que el TDZ. Por otro lado, el cannabis es muy sensible a las proporciones de hormonas si se rebasan los valores. Pueden inhibir el crecimiento o favorecer anomalías.

  12. Los siguientes 3 Usuarios dan las gracias a Rivalpo por este Post:

    ☺aKHeN☺ (07/06/2015), kus (14/07/2015), wakalao (12/06/2015)

  13. #7
    Fecha de Ingreso
    07 Jul, 10
    Mensajes
    355
    Gracias
    193
    226 gracias recibidas en 131 Posts
    Mencionado
    13 Mensaje(s)
    Etiquetado
    0 Tema(s)
    Citado
    55 Mensaje(s)

    Re: Cultivo in vitro

    Pasarme no se... Yo le echo un ml por litro q es lo que dice el fabricante...
    Si no son los hormonas adecuada tampoco lo se..
    A nadie le huelen sus pedos, ni sus hijos le parecen feos!!!

  14. El siguiente Usuario da las gracias a ghoufrane por este Post:

    kus (14/07/2015)

  15. #8
    Fecha de Ingreso
    29 Mar, 09
    Ubicación
    Mediterráneo
    Mensajes
    511
    Gracias
    1,821
    3,690 gracias recibidas en 482 Posts
    Mencionado
    152 Mensaje(s)
    Etiquetado
    0 Tema(s)
    Citado
    204 Mensaje(s)

    Re: Cultivo in vitro

    1 ml/ litro de citoquinina y de auxina es demasiado, prueba con 0,5 ml/litro (equivalente a 1mg/litro)
    Las hormonas soportan muy mal las temperaturas (son termolábiles), es aconsejable conservarlas en la nevera alrededor de 4° y sacarlas exclusivamente para las experiencias.

    medio de cultivo Murashige y skoog + vitaminas, agar, hormonas BAP (citoquininas y auxinas), antibacteriano y antifúngico PPM
    - para el arraigamiento, el medio Murashige y skoog (MS) adecuado es de referencia MSEL.

    - para la formacion de callos (proliferación celular) el medio es de referencia MSAC

    Reduciendo la temperatura a 10° se pueden conservar los callos en quisciencia durante varios años, y utilizarlos más tarde para efectuar una regeneración en medio MSEL. De esa manera es fácil conservar decenas de genéticas en la nevera en forma de callos y regenerarlos en el momento deseado. Esta técnica, economica y muy practica, permite la perennidad de las variedades y un suministro constante e infinito de esquejes.

    Con el cannabis, las mejores regeneraciones se obtienen con trozos de hojas o de peciolo.

    gallery_731869_4077_3946.jpg

  16. Los siguientes 6 Usuarios dan las gracias a Rivalpo por este Post:

    ☺aKHeN☺ (07/06/2015), Bebopman (19/12/2016), kus (14/07/2015), nahiatxo (09/06/2015), Smo]{ing (09/06/2015), wakalao (12/06/2015)

  17. #9
    Fecha de Ingreso
    07 Jul, 10
    Mensajes
    355
    Gracias
    193
    226 gracias recibidas en 131 Posts
    Mencionado
    13 Mensaje(s)
    Etiquetado
    0 Tema(s)
    Citado
    55 Mensaje(s)

    Re: Cultivo in vitro

    Uuhhff me pierdo!!

    Yo es en plan hobby..

    Yo desinfecto todo y uso esta tabla para crear el medio...

    1. Agua destilada
    2. 1 mL solución BAP (prescindible, aunque ayuda mucho)
    3. 1 mL solución PPM (prescindible, aunque ayuda mucho)
    4. 30 gr de sacarosa (o azúcar)
    5. 3 gr de medio Murashige & Skoog + vitaminas (liofilizado)
    6. 7-8 gr de agar agar (gelificante)
    7. Añadir ácido (clorhídrico como el salfumán o acético como el vinagre) o base (sosa) para ajustar el pH entre 5'6 y 5'8

    Despues he visto gente que usa botes estancos y otros botes con un microfiltro en la tapa... Para que salga el co2...

    La verdad que el bap no vino en temperatura ambiente y es como lo tengo..
    A nadie le huelen sus pedos, ni sus hijos le parecen feos!!!

  18. Los siguientes 3 Usuarios dan las gracias a ghoufrane por este Post:

    kus (14/07/2015), Rivalpo (09/06/2015), wakalao (12/06/2015)

  19. #10
    Fecha de Ingreso
    29 Mar, 09
    Ubicación
    Mediterráneo
    Mensajes
    511
    Gracias
    1,821
    3,690 gracias recibidas en 482 Posts
    Mencionado
    152 Mensaje(s)
    Etiquetado
    0 Tema(s)
    Citado
    204 Mensaje(s)

    Re: Cultivo in vitro

    Hola,

    ¿con que producto esterilizas? ¿Utilizas un mechero Bunsen? Es imprescindible para formar un cono de esterilidad de unos 20/30 cm alrededor del lugar donde haces las manipulaciones.


    Edito:
    url.jpg
    Cono de esterilidad alrededor de la llama

    Cuando el mechero bunsen esta encendido se forma por acción de la llama un sector denominado "cono de esterilidad" dentro del cual se debe guardar aquellos materiales que se desean mantener en condiciones de esterilidad.
    Última edición por Rivalpo; 09/06/2015 a las 22:42 PM

  20. Los siguientes 4 Usuarios dan las gracias a Rivalpo por este Post:

    ☺aKHeN☺ (10/06/2015), kus (14/07/2015), pep@ (12/10/2016), wakalao (12/06/2015)

  21. #11
    Fecha de Ingreso
    07 Jul, 10
    Mensajes
    355
    Gracias
    193
    226 gracias recibidas en 131 Posts
    Mencionado
    13 Mensaje(s)
    Etiquetado
    0 Tema(s)
    Citado
    55 Mensaje(s)

    Re: Cultivo in vitro

    He utilizados botes esteril de farmacia,
    Otros que he esterilizado con olla express.

    Y ahora me llegaron unos botes de laboratorio con microfiltro para la expulsion del co2 pero la verdad no lo he utilizado..

    No he utilizado nada de mechero...
    A nadie le huelen sus pedos, ni sus hijos le parecen feos!!!

  22. El siguiente Usuario da las gracias a ghoufrane por este Post:

    kus (14/07/2015)

  23. #12
    Fecha de Ingreso
    29 Mar, 09
    Ubicación
    Mediterráneo
    Mensajes
    511
    Gracias
    1,821
    3,690 gracias recibidas en 482 Posts
    Mencionado
    152 Mensaje(s)
    Etiquetado
    0 Tema(s)
    Citado
    204 Mensaje(s)

    Post Re: Cultivo in vitro

    No olvides que el aire esta cargado de particulas en suspensión donde se fijan bacterias, virus y hongos. El cono de esterilidad sirve a proteger tu material de la infecciones mientras manipulas al aire libre. De nada sirve esterilizar el material si se contamina con el aire mientras lo manipulas.

    Desinfecta el plan de trabajo y tus manos con alcool de 90%. Luego enciende el mechero Bensen (con llama blanca) y delimita un radio de 20 a 30 de cm que constituirá el cono de esterilidad donde practicaras todas las manipulaciones con el material esterilizado.

  24. Los siguientes 3 Usuarios dan las gracias a Rivalpo por este Post:

    ☺aKHeN☺ (10/06/2015), kus (14/07/2015), wakalao (12/06/2015)

  25. #13
    Fecha de Ingreso
    07 Jul, 10
    Mensajes
    355
    Gracias
    193
    226 gracias recibidas en 131 Posts
    Mencionado
    13 Mensaje(s)
    Etiquetado
    0 Tema(s)
    Citado
    55 Mensaje(s)

    Re: Cultivo in vitro

    Pero si lo estoy manipulando dentro del globebox,
    No hace falta hacerlo a la llama no?
    Última edición por ghoufrane; 10/06/2015 a las 00:59 AM
    A nadie le huelen sus pedos, ni sus hijos le parecen feos!!!

  26. El siguiente Usuario da las gracias a ghoufrane por este Post:

    kus (14/07/2015)

  27. #14
    Fecha de Ingreso
    29 Mar, 09
    Ubicación
    Mediterráneo
    Mensajes
    511
    Gracias
    1,821
    3,690 gracias recibidas en 482 Posts
    Mencionado
    152 Mensaje(s)
    Etiquetado
    0 Tema(s)
    Citado
    204 Mensaje(s)

    Post Re: Cultivo in vitro

    Creo que tu problema procede de una esterilización incompleta y/o de las cantitades de hormonas que echas al medio. En condiciones normales de temperatura (18°/20°) y de luminosidad (floja), las muestras deberían brotar entre 3 semanas y un mes.

    Te aconsejo que revises enteramente el protocolo de esterilización de las cajas, del medio y de las muestras (cambialo si hace falta), y tambien que bajes las cantidades de BAP a 0,5 ml/litro.


    Un saludo

  28. Los siguientes 3 Usuarios dan las gracias a Rivalpo por este Post:

    kus (14/07/2015), RamiroP (14/07/2015), wakalao (12/06/2015)

  29. #15
    Fecha de Ingreso
    15 Jul, 12
    Ubicación
    golfo de vizcaya
    Mensajes
    1,622
    Gracias
    3,570
    2,877 gracias recibidas en 1,033 Posts
    Mencionado
    168 Mensaje(s)
    Etiquetado
    1 Tema(s)
    Citado
    518 Mensaje(s)

    Re: Cultivo in vitro

    Como experimento me parece precioso.

    un 10 al post!

    Está claro que tienes serias dificultades con la asepsia prueba con antibióticos.

    Te queda lo más difícil, la aclimatación.

    ¿para qué se usa el cultivo invitro con el cannabis? no es mucho más económico, menos exigente y rápido clonar las plantas?
    I am a computer. I am dumber than any human and smarter than any administrator.

  30. Los siguientes 2 Usuarios dan las gracias a kus por este Post:

    BALCANI (17/08/2015), Rivalpo (23/04/2016)

+ Responder Tema
Página 1 de 2 12 ÚltimoÚltimo

Usuarios Etiquetados

Permisos de Publicación

  • No puedes crear nuevos temas
  • No puedes responder temas
  • No puedes subir archivos adjuntos
  • No puedes editar tus mensajes